Ključna razlika - toplo proti hladni tripsinizaciji
Topla in hladna tripsinizacija sta dve metodi, ki se uporabljata za encimsko razčlenitev celic pri gojenju živalskih celic. Ključna razlika med toplim in hladnim tripsiniziranjem je, kot že poimenujejo imena, odvisna od temperature, pri kateri je dodan tripsin za celično razčlenitev. Topla tripsinizacija poteka v pogojih z višjimi temperaturami (36,5 - 37 0 C), hladna tripsinizacija pa v nizkotemperaturnih pogojih.
Med postopkom primarnega gojenja celic živalskih celic se uporabljajo tri glavne metode, ki so se izkazale za uspešne. Tri metode vključujejo mehansko razčlenitev celic, encimsko razčlenitev celic in primarno tehniko eksplantacije. Encimska razčlenitev celic, ki vodi do izolacije celic, poteka z encimom, ki razgrajuje beljakovine, tripsinom. Zato je ta postopek znan kot tripsinizacija. Tripsinizacijo lahko izvedemo v dveh različnih pogojih, in sicer v topli in hladni. Topla tripsinizacija je metoda obdelave celic s tripsinom v toplih pogojih pri temperaturi 36,5 - 37 0C. Hladna tripsinizacija je postopek obdelave tripsina, ki poteka v hladnejših razmerah, po možnosti v ledu, ki vzdržuje zelo nizke temperature.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je topla tripsinizacija
3. Kaj je hladna tripsinizacija
4. Podobnosti med toplo in hladno tripsinizacijo
5. Vzporedna primerjava - Topla vs hladna tripsinizacija v tabelarni obliki
6. Povzetek
Kaj je topla tripsinizacija?
Tripsinizacijo lahko izvedemo za razčlenitev celičnih komponent, da izoliramo celice, da dobimo primarno celično kulturo. Tripsin je encim za razgradnjo beljakovin, encimska zmes, ki se uporablja pri tripsinizaciji, pa je lahko surov ekstrakt ali prečiščen proizvod. Surovi ekstrakt naj bi bil učinkovitejši pri lizi beljakovin in razgradnji celic, saj vsebuje druge razgradne encime.
Topla tripsinizacija je najpogosteje uporabljena encimska metoda za razčlenitev celic, ki poteka v pogojih z višjimi temperaturami. Pred zdravljenjem s tripsinizacijo se želeno tkivo seseklja na manjše koščke. Olajša postopek razčlenitve. Nato sesekljano tkivo speremo v posebnem mediju, znanem kot medij za razkosanje bazalne soli.
Po končanem koraku pranja se celice pretvorijo v bučko, ki vsebuje aktivni encim, to je tripsin. Ker ta tehnika vključuje protokol za toplo tripsinizacijo, se tripsin približno štiri ure postavi na temperaturo okoli 37 ° C.
Slika 01: Tripsin
Vsebino zmešamo in premešamo z uporabo metod centrifugiranja za lažjo uporabo protokola in pospešitev postopka razčlenitve. Ko dosežemo priporočeni čas, lahko celice dobimo iz supernatanta. Celice, pridobljene iz supernatanta, se nato inkubirajo pri določeni temperaturi in času.
Kaj je hladna tripsinizacija?
Hladna tripsinizacija je druga vrsta tripsinizacije, ki poteka v hladnih razmerah. Pri tej tehniki celice, ki jih sesekljamo in operemo, položimo v viale na led in nato namočimo s tripsinom. Obdobje namakanja je veliko daljše - približno 6 - 24 ur.
Po končanem postopku namakanja se tripsin odstrani iz celičnega lizata, koščki tkiva pa se nadaljnje inkubirajo pri 37 ° C približno 20 - 30 minut. Do razčlenitve celic pride s ponavljajočim pipetiranjem mešanice tkiv. To bo celicam omogočilo, da se ločijo od membrane in pridejo do supernatanta. Ko so celice v supernatantu, jih inkubiramo in gojimo pri želeni temperaturi in časovnem obdobju.
Metoda hladnega tripsiniziranja ima več prednosti
- Večji izkoristek celic, ki so sposobne preživeti, je čim manjši. Poškodbe celic so zmanjšane z neuporabo postopkov centrifugiranja.
- Zelo priročna metoda.
- Manj naporen.
Glavna omejitev metode hladnega tripsiniziranja je, da v enem primeru ni mogoče uporabiti velikih količin.
Kakšne so podobnosti med toplo in hladno tripsinizacijo?
- Tako v procesu toplega kot hladnega tripsiniziranja se encim tripsin uporablja za razčlenitev celic.
- Postopki toplega in hladnega tripsiniziranja se uporabljajo v postopkih celične kulture za razčlenitev celic.
- Tako pri postopkih obdelave toplega kot hladnega tripsiniziranja celice izvirajo iz supernatanta.
Kakšna je razlika med toplo in hladno tripsinizacijo?
Diff Article Sredina pred mizo
Topla vs hladna tripsinizacija |
|
| Topla tripsinizacija je metoda obdelave celic s tripsinom v toplih pogojih pri temperaturi 36,5 - 37 0. | Hladna tripsinizacija je postopek obdelave tripsina, ki poteka v hladnejših razmerah, po možnosti v ledu, ki vzdržuje zelo nizke temperature. |
| Protokol | |
| Sesekljane koščke tkiva ves čas postopka vzdržujemo pri 37 ° C. | Sesekljane koščke tkiva sprva vzdržujemo pri ledeno hladnih temperaturah, nato pa vzdržujemo na 37 0. |
| Temperatura | |
| Topla tripsinizacija se pojavi pri 36,5 - 37 0 | Hladna tripsinizacija se pojavi pri ledeno hladnih temperaturah. |
| Porabljen čas | |
| Manj časa, potrebnega za celoten postopek (približno 4 ure) tople tripsinizacije. | Daljši čas (približno 6 - 24 ur) za hladno tripsinizacijo. |
| Donos sposobnih celic | |
| Nizka vsebnost tople trippsinizacije. | Visoko v hladni tripsinizaciji. |
| Uporaba centrifugiranja | |
| Za razčlenitev celic v topli tripsinizaciji je potrebno centrifugiranje. | Centrifugiranje pri hladni tripsinizaciji ni potrebno. |
| Začetna količina tkiva za tripsinizacijo | |
| Za toplo tripsinizacijo lahko uporabimo večjo količino tkiva. | Manjšo količino tkiva lahko uporabimo pri hladni tripsinizaciji. |
| Poškodba celic | |
| Visoka zaradi centrifugiranja v toplem tripsinizaciji. | Manj zaradi hladne tripsinizacije. |
Povzetek - Topla vs hladna tripsinizacija
Tripsinizacija je metoda uporabe encima tripsina, ki razgrajuje beljakovine, za razčlenitev in pripravo primarnih celičnih kultur med postopkom gojenja celic. Obstajata dve glavni tehniki tripsinizacije, ki temeljijo na temperaturah, uporabljenih med postopkom. So topla in hladna tripsinizacija. Topla tripsinizacija se izvaja pri 37 0 C, hladna tripsinizacija pa v ledeno mrzlih pogojih. Čeprav hladna tripsinizacija traja dlje časa za dokončanje, naj bi imela večji donos vitalnih celic. To je posledica dejstva, da je poškodba celic pri hladni trippsinizaciji čim manjša, saj ne uporablja močnih korakov centrifugiranja. To je razlika med toplo in hladno tripsinizacijo.
