Ključna razlika - T4 vs T7 DNA ligaza
DNA ligaza je pomemben encim, ki se uporablja v tehnikah molekularne biologije. Deluje kot molekularno lepilo za povezovanje nukleotidov z oblikovanjem fosfodiesterskih vezi med nukleotidi. Fosfodiesterske vezi nastanejo med 3 'hidroksilnim koncem sladkornega dela in 5' koncem fosfatne skupine. DNA ligaza je bistvenega pomena v procesu razmnoževanja, da se pridruži Okazaki fragmentom zaostale verige, med mehanizmi popravljanja DNA in poskusi kloniranja in vitro, da se želenemu genu, ki nas zanima, pridruži vektorski genom. Trenutno molekularni biologi uporabljajo dve glavni ligazi DNA: DNA DNA T4 in T7. DNA ligaza T4 je eden prvih encimov, ki je bil izoliran iz bakterije T4 bakterije. DNA ligaza T7, ki je manjši protein, je encim, izoliran iz bakterije T7 bakterije. To je ključna razlika med DNA-ligazoma T4 in T7.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kakšno je delovanje DNA ligaze
3. Kaj je T4 DNA ligaza
4. Kaj je T7 DNA ligaza
4. Podobnosti med T4 in T7 DNA ligazo
5. Vzporedna primerjava - T4 v primerjavi s T7 DNA ligazo v tabelarni obliki
6. Povzetek
Kakšno je delovanje DNA ligaze?
Povezovanje DNK poteka v tristopenjski reakciji. Prvi korak je nukleofilni napad na alfa-fosfor ATP, ki tvori kovalentni vmesni encim-adenilat, v katerem je AMP povezan s končnim dušikom lizina v stranski verigi. V drugem koraku pride do nukleofilnega napada na fosfor encima-adenilata s 5'-fosfatno zaključenim DNA substratom, ki sprosti lizin in tvori DNA-adenilat. V zadnjem koraku DNA-adenilat napade 3'-OH druge verige DNA, sprosti AMP in se pridruži polinukleotidom.
Kaj je T4 DNA ligaza?
T4 ligaza je bila prva ligaza, ki so jo izolirali in identificirali Meselson, Weigle in Kellenberger, in je bila prva proizvedena komercialna ligaza. T4 DNA ligaza je od ATP odvisen encim, ki katalizira tvorbo fosfodiesterske vezi. Je enojna polipeptidna veriga z 487 aminokislinskimi ostanki in ima molekulsko maso približno 77 kDa. Optimalni pH za njegovo aktivnost je od 7,5 do 8.
Slika 01: T4 DNA ligaza
Kot pove že samo ime, je T4 DNA ligaza prisotna v bakteriofagu T4 in je bila izolirana, ko je fag proizvedel encim ob okužbi z E. coli. Encimski ligati dvoverižnih dupleksov DNA s topimi konci in drobci, ki jih je treba vezati, bi morali biti v neposredni bližini.
Kaj je T7 DNA ligaza?
T7 ligaza je protein 41 kDa, ki ga proizvaja bakterija T7 in je izoliran z okužbo celic E. coli. Glavna naloga ligaza T7 je povezati duplekse DNA skozi fosfodiesterske vezi in med poskusi kloniranja združiti bližnje fragmente DNA. Optimalni pH za DNA ligazo T7 je v območju 7,0 - 7,2. T7 ligaza je odvisna od ATP. DNA ligaze T7 so sposobne tudi žariti hibride DNA in RNA, kar povzroča nenormalne konformacije med transkripcijo; vendar ta pojav še vedno raziskujejo in vitro študije.
Kakšne so podobnosti med DNA ligazo T4 in T7?
- DNA ligaze T4 in T7 sodelujejo v ligacijski reakciji z žarjenjem dupleksov DNA s tvorbo fosfodiesterske vezi med 3 'OH koncem in 5' fosfatnim koncem fragmenta DNA.
- Oba encima ligirata duplekse DNK s topimi konci, ki so v neposredni bližini.
- Oba encima sta odvisna od ATP.
- Te encime izoliramo z okužbo celic E. coli z določenim bakteriofagom.
-
Uporaba obeh encimov vključuje:
- Molekularno kloniranje - za povezavo genov, ki nas zanimajo, z vektorjem
- Popravilo DNK - za popravilo dvoverižnih niš
- Replikacija DNA in vitro
- Verižna reakcija ligaze
Kakšna je razlika med DNA ligazo T4 in T7?
Diff Article Sredina pred mizo
T4 vs T7 DNA ligaza |
|
| Tip DNA ligaze DNA DNA ligaze, izoliran iz bakteriofaga T4, in sodeluje pri ligaciji sosednjih fragmentov DNA s tvorbo fosfodiesterske vezi. | Tip DNA ligaze DNA DNA ligaze, izoliran iz bakteriofaga T7, in sodeluje pri ligaciji sosednjih fragmentov DNA s tvorbo fosfodiesterske vezi. |
| Velikost beljakovin | |
| Velikost T4 DNA ligaze je 77 kDa - večja v primerjavi s T7 DNA ligazo. | Velikost T7 DNA ligaze je 41 kDa. |
| Optimalni pH | |
| Območje pH, ki deluje na T4 DNA ligazo, je 7,5 - 8,0. | Območje pH, ki deluje na T7 DNA ligazo, je 7,0 - 7,2. |
Povzetek - T4 vs T7 DNA ligaza
DNA ligaze so pomemben razred encimov, ki sodelujejo pri molekularnem kloniranju za tvorbo rekombinantnih molekul DNA, ki vsebujejo gen, ki nas zanima. Reakcija ligacije je reakcija, ki izkorišča energijo in v teku so nove raziskovalne študije za izboljšanje natančnosti z modulacijo razpoložljivih ligaz. DNA ligaze T4 in T7 sta dve vrsti pomembnih encimov DNA ligaze, ki se uporabljata v molekularno bioloških tehnikah. DNA ligaza T7 je tudi rezultat raziskav, ki so temeljile na primarni ligazi, izolirani iz E. coli, okužene s T4. T7 je zaradi manjše velikosti prikazan bolj učinkovito in natančno pri opravljanju svoje funkcije. To je razlika med T4 in T7 ligazo.
Prenesite PDF različico T4 vs T7 DNA Ligase
Lahko prenesete različico tega članka v obliki PDF in jo uporabite za namene brez povezave v skladu z opombami k navedbam. Prosimo, prenesite različico PDF tukaj Razlika med T4 in T7 Ligase.
