PCR v primerjavi s PCR v realnem času
PCR ali polimerazna verižna reakcija je revolucionarno odkritje v sodobni molekularni biologiji, ki ga je prvi razvil kemik Kary Mullis leta 1983. Omogoča ojačanje posameznega zaporedja v kompleksni DNA za analizo. Osnovna ideja PCR je, da sta dva začetnika, ki dopolnjujeta nasprotne verige zaporedja DNA, usmerjena drug proti drugemu; temeljni premazi proizvajajo komplementarne pramene, ki vsebujejo drugi temeljni premaz. Rezultat je torej velika količina zaporedja, ki ustreza DNA, ki leži med obema primeroma. Encim DNA polimeraza se uporablja za razširitev začetnikov v PCR. DNA polimeraza je termostabilni encim in ima sposobnost preživeti pri visokih temperaturah (94 do 95 ° C), ki se uporabljajo za denaturacijo vzorčne DNA.
PCR vključuje tri korake, in sicer ponavljajoče se kroge denaturacije, žarjenje primerjev in sintezo DNA. Za izvedbo te reakcije se uporablja termociklični stroj, ki ga je mogoče programirati za hitro in natančno spreminjanje temperatur. Aplikacije PCR so kriminalistične preiskave, prstni odtis DNK, odkrivanje patogenov in analiza DNK zgodnjih človeških vrst.
Kaj je običajna PCR?
Obstajajo tri glavne faze običajne PCR, in sicer; Stopnja pomnoževanja DNA, ločevanje PCR in odkrivanje produktov. Ločevanje segmentov DNA se običajno opravi z elektroforezo v agaroznem gelu. Izdelke nato obarvamo z eteiduim bromidom. Končno zaznavanje dosežemo z vizualizacijo trakov na gelih pod UV svetlobo. Zato končni rezultati običajne PCR niso izraženi kot številke. Običajno lahko običajni PCR zazna samo en parameter.
Kaj je PCR v realnem času?
PCR v realnem času lahko zazna pomnoževanje izdelkov, saj se ti sintetizirajo. Z razvojem tehnologije je PCR postala zelo priljubljena tehnika, zlasti za odkrivanje in prepoznavanje bakterij v živilih. PCR v realnem času uporablja sistem florescentnega barvila in termocikler, opremljen s funkcijo fluorescentne detekcije.
Kakšna je razlika med običajnim PCR in PCR v realnem času?
• Konvencionalna PCR je bolj zamudna, saj za analizo ojačenih produktov PCR uporablja gelno elektroforezo. V nasprotju s tem je PCR v realnem času manj zamuden, saj lahko zazna ojačanja v zgodnjih fazah reakcije.
• PCR v realnem času zbira podatke v eksponentni fazi rasti PCR, medtem ko tradicionalni PCR zbira podatke na končni točki reakcije.
• Rezultati končne točke običajne PCR morda niso zelo natančni, vendar so rezultati PCR v realnem času zelo natančni.
• PCR v realnem času je bolj občutljiv kot običajni PCR.
• Konvencionalni PCR ima zelo slabo ločljivost, medtem ko lahko PCR v realnem času zaradi visoke ločljivosti zazna zelo malo sprememb.
• Zaznavanje končne točke običajnega PCR ima kratek dinamični razpon, medtem ko ima zaznavanje PCR v realnem času širok dinamični razpon.
• Za razliko od običajne PCR tehnike samodejnega zaznavanja najdemo v PCR v realnem času.
• Konvencionalni PCR je zelo dovršen in zahteva več dela kot PCR v realnem času.
• Za razliko od PCR v realnem času, običajni PCR ne more razlikovati med mrtvimi in živimi bakterijami.
• PCR v realnem času uporablja sistem fluorescentnih barvil za zaznavanje izdelkov, medtem ko običajni PCR uporablja etidij bromid in UV svetlobo za vizualizacijo pasov v mediju z agaroznim gelom.
