Ključna razlika - Benzonase proti DNase
Razgradnja nukleinskih kislin je pomembna za številne tehnike molekularne biologije. Veliko se uporablja v tehnologiji rekombinantne DNA, da se znebi neželenih fragmentov DNA in RNA. Encimi, ki razgrajujejo nukleinsko kislino, se imenujejo nukleaze in so lahko različnih vrst glede na zahtevano funkcijo. Nukleaze, ki razgrajujejo DNA, so znane kot DNaze, medtem ko tiste, ki razgrajujejo RNA, so znane RNaze. Ti encimi se večinoma uporabljajo v poskusih in vitro, kjer se in vitro izvajajo molekularni testi za izolacijo čiste DNA, RNA ali beljakovin. Benzonaze so vrsta nukleaz, ki razgrajujejo tako DNA kot RNA, DNaze pa razgrajujejo samo DNA. To je ključna razlika med benzonazo in DNazo.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je benzonaza
3. Kaj je DNaza
4. Podobnosti med benzonazo in DNazo
5. Vzporedna primerjava - Benzonaza v primerjavi z DNazo v tabelarni obliki
6. Povzetek
Kaj je benzonaza?
Benzonaza je gensko spremenjena endonukleaza iz Serratia marcescens. Ta encim se proizvaja v gostiteljih E. coli v industrijskem obsegu. Benzonaza je sposobna cepiti dvoverižno DNA, linearno DNA, krožno DNA in enoverižno RNA. Benzonaza je tako poslovno pomembna. Benzonazni encim je beljakovinski dimer, ki ima 245 enakih aminokislin, približno 30 kDa podenot z dvema esencialnima disulfidnima vezema. Benzonaza cepi nukleinske kisline na svojem 5 'koncu in povzroči fragmente s prostimi 5' konci. Benzonaza lahko cepi nukleinske kisline v katerem koli zaporedju, vendar ima raje območja, bogata z GC.
Benzonaza je shranjena pri -20 0 C. Ugotovljeno je, da je optimalni pH za encimsko aktivnost 8,0 - 9,2. Aplikacije Benzonase vključujejo pripravo vzorcev za beljakovinsko 2D gel elektroforezo, kjer Benzonaza odstranjuje vezane nukleinske kisline in odstranjuje kontaminante nukleinske kisline iz rekombinantnih beljakovinskih pripravkov. Uporablja se tudi za zmanjšanje viskoznosti beljakovinskih izvlečkov in preprečevanje strjevanja celic v celični mešanici.
Kaj je DNaza?
DNaza je nukleaza, hidrolitični encim, ki je sposoben samo cepiti dvoverižno DNA. Obstajata dve glavni vrsti DNaz: DNaza I in DNaza II. DNaza I sodeluje pri cepljenju dvoverižne DNA, da tvori polinukleotide s 5 'prostimi konci. DNaza II sodeluje pri cepljenju dvoverižne DNA, da proizvede polinukleotidne verige s 3 'prostimi konci ali previsi.
DNaza I
DNaza I deluje pri optimalnem pH med 7,0 - 8,0. Aktivnost encimov je odvisna od številnih ionskih kofaktorjev, ki vključujejo Ca 2+, Mg 2+ ali Mn 2+. Dejavnost Mg 2+ in Mn 2+ določa funkcijo DNaze I. V prisotnosti Mg 2+ DNaza I cepi vsako verigo dsDNA neodvisno. To poteka naključno. Nasprotno pa encim v prisotnosti Mn 2+ cepi obe verigi DNA na približno istem mestu. Ta cepitev bo povzročila dve vrsti fragmentov DNA; en tip s topimi konci in drugi tip z enim ali dvema previsoma nukleotidov.
Slika 02: DNaza
DNaza II
DNaza II deluje pri optimalnem pH 4,5-5,0 in za njeno delovanje so potrebni dvovalentni kovinski ioni, podobno kot DNaza I. Mehanizem DNaze II je sestavljen iz treh glavnih korakov.
- V hrbtenici DNA nastane več enojnih prelomov.
- Nastanejo v kislini topni nukleotidi in oligonukleotidi.
- V zadnji fazi pride do nelinearnega hiperkromnega premika.
Glavni zaviralci encima DNaza vključujejo kovinske kelatorje, prehodne kovine in kemikalije, kot sta natrijev dodecil sulfat in β-merkaptoetanol.
Glavne aplikacije DNaze vključujejo pripravo ekstraktov RNA in beljakovinskih ekstraktov brez DNA in odstranjevanje vzorčne DNA med eksperimenti in vitro transkripcije.
Kakšne so podobnosti med benzonazo in DNazo?
- Oba sta hidrolitična encima.
- Obe sta nukleazi.
- Oba sodelujeta tako, da cepita fosfodiesterske vezi nukleinskih kislin.
- Oba zahtevata optimalen pH in temperature shranjevanja, da ohranita aktivnost encima.
- Inhibitorji encimov vključujejo kelatna sredstva, prehodne kovine in detergentne kemikalije.
- Aplikacije so v glavnem osredotočene na pridobivanje ekstraktov DNA, RNA in beljakovin z visoko čistostjo.
- Oba encima lahko proizvedemo z genskim inženiringom.
Kakšna je razlika med benzonazo in DNazo?
Diff Article Sredina pred mizo
Benzonaza proti DNase |
|
| Benzonaza je encim, ki lahko cepi dvoverižno DNA, linearno DNA, krožno DNA in RNA. | DNaza je encim, ki lahko cepi dvoverižno DNA. |
| Substrat za encim | |
| Tako DNA kot RNA sta substrata za benzonazo. | DNA je substrat za DNazo. |
| Struktura | |
| Optimalno območje pH benzonaze je 7,0 -8,0 | Optimalni razpon pH DNaze I je 7,0 - 8,0 in DNaze II 4,5 - 5,0. |
Povzetek - Benzonaza proti DNase
Nukleazni encimi se pogosto uporabljajo v različnih eksperimentalnih postopkih v zvezi z molekularno biologijo in genskim inženiringom. Benzonaza in DNaza sta dve vrsti nukleaz. Benzonaza sodeluje pri razgradnji DNA in RNA, DNaza pa pri cepljenju dvoverižne DNA. To je osnovna razlika med benzonazo in DNazo. Trenutno se oba tipa nukleaz proizvajata s tehnologijo rekombinantne DNA, ki daje encime višje kakovosti, ki so optimizirani za največjo proizvodnjo.
Prenesite PDF različico Benzonase vs DNase
Lahko prenesete različico tega članka v obliki PDF in jo uporabite za uporabo brez povezave, kot je navedeno v opombi. Prosimo, prenesite različico PDF tukaj Razlika med benzonazo in DNazo
