Ključna razlika - Nick Translation vs Primer Extension
Prevajanje Nicka in podaljšanje primerja sta dve pomembni tehniki, ki se izvajata v molekularni biologiji. Ključna razlika med prevajanjem vzdevkov in podaljšanjem primerka je, da postopek prevajanja vzdevkov proizvaja označene sonde za druge tehnike hibridizacije, medtem ko metoda podaljšanja primerka identificira določeno zaporedje RNA iz mešanice in razkrije informacije o izražanju mRNA. Obe tehniki sta zelo pomembni in se redno izvajata v laboratorijih za molekularne raziskave.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je Nick Translation
3. Kaj je Extension Primer
4. Vzporedna primerjava - Nick Translation vs Primer Extension
5. Povzetek
Kaj je Nick Translation?
Prevajanje Nicka je pomembna tehnika, ki se uporablja za pripravo označenih sond za različne molekularno biološke tehnike, kot so blotiranje, in situ hibridizacija, fluorescentna in situ hibridizacija itd. Je in vitro metoda označevanja DNA. DNK sonde se uporabljajo za identifikacijo specifičnih zaporedij DNA ali RNA. S pomočjo označene sonde lahko posebne fragmente označimo ali vizualiziramo iz kompleksne mešanice nukleinske kisline. Zato so označene sonde pripravljene z uporabo različnih tehnik, ki se uporabljajo za različne tehnike. Nickov prevod je ena takih metod, ki proizvaja označene sonde s pomočjo encimov DNaze 1 in DNA polimeraze 1.
Proces prevajanja vzdevkov se začne z encimsko aktivnostjo DNaze 1. DNaza 1 v fosfatni hrbtenici dvoverižne DNA vnese zareze s cepljenjem fosfodiesterskih vezi med nukleotidi. Ko se vzdevek ustvari, bo nastala prosta 3 'OH skupina nukleotida in nanjo bo deloval encim DNA polimeraza 1. 5 'do 3' eksonukleazna aktivnost DNA polimeraze 1 odstrani nukleotide iz reza proti 3 'smeri DNA verige. Hkrati deluje polimerazna aktivnost encima DNA polimeraza 1 in doda nukleotide, ki nadomestijo odstranjene nukleotide. Če so bili nukleotidi označeni, bodo nadomeščeni označeni nukleotidi in bodo označili DNA za identifikacijo. Ta novo sintetizirana označena DNA se lahko uporablja kot sonde v različnih reakcijah hibridizacije v molekularni biologiji.
Slika 01: Postopek prevajanja Nicka
Kaj je Primer Extension?
Podaljšanje primerja je tehnika, ki se uporablja za iskanje posebnega zaporedja RNA iz mešanice RNA in lociranje 5 'konca prepisa mRNA. Uporablja se tudi za preučevanje strukture RNA in izražanja. Metoda podaljšanja temeljnega premaza se izvaja z označenimi temeljnimi premazi ali z označenimi nukleotidi. Če uporabimo označene primerje, to izključuje potrebo po označevanju nukleotidov, ki se uporabljajo za sintezo cDNA. V tej tehniki je več korakov. Začne se z ekstrakcijo RNA iz vzorca. Nato se zmesi doda označeni oligonukleotidni primer, skupaj s potrebnimi sestavinami za sintezo cDNA določenega zaporedja RNA. Temeljne žarnice dopolnjujejo z mešanico. Z uporabo zaporedja žarjenega premaza kot predloge,encim reverzna transkriptaza sintetizira komplementarno DNA (cDNA) zaporedja RNA. Primerno žarjenje in reverzna transkripcija se zgodita le, če je v vzorcu prisotno določeno zaporedje RNA. Na koncu lahko pri izvedbi denaturacijske gelne elektroforeze določimo velikost zaporedja RNA. Prav tako je enostavno najti +1 bazo zaporedja mRNA (mesto iniciacije transkripcije) z metodo podaljšanja primerja. Količino mRNA, prisotno v vzorcu, lahko določimo s to metodo, če uporabimo presežek primerja. Prav tako je enostavno najti +1 bazo zaporedja mRNA (mesto iniciacije transkripcije) z metodo podaljšanja primerja. Količino mRNA, prisotno v vzorcu, lahko določimo s to metodo, če uporabimo presežek primerja. Prav tako je enostavno najti bazo +1 v zaporedju mRNA (mesto iniciacije transkripcije) z metodo podaljšanja primerja. Količino mRNA v vzorcu lahko določimo s to metodo, če uporabimo presežek primerja.
Slika 02: Podaljšanje temeljnega premaza
Kakšna je razlika med Nick Translation in Primer Extension?
Diff Article Sredina pred mizo
Nick Translation vs Primer Extension |
|
| Prevajanje Nicka je postopek, ki ustvarja označene DNA sonde za različne reakcije hibridizacije. | Podaljšanje primerja je tehnika, ki se uporablja za iskanje specifične RNA ali za preučevanje izražanja genov. |
| Uporabljeni encimi | |
| Uporabljamo encime DNaze 1 in DNA polimeraze. | Uporablja se encim reverzne transkriptaze. |
| Pomen | |
| Prevajanje Nicka olajša označevanje določenega zaporedja DNA. | Podaljšanje primerja omogoča zaznavanje specifične velikosti zaporedja mRNA in količine, prisotne v vzorcu. |
Povzetek - Nick Translation vs Primer Extension
Nickov prevod je metoda, ki se uporablja za sintezo označenih sond na podlagi aktivnosti encimov DNaze 1 in E coli DNA polimeraze 1. To je metoda in vitro, ki se je uporabljala v laboratorijih pred različnimi tehnikami hibridizacije. Med prevajanjem nicka 5'-3 'eksonukleazna aktivnost DNA polimeraze 1 odstrani nukleotide pred nickom, polimerazna aktivnost DNA polimeraze 1 pa nadomesti odstranjene nukleotide z označenimi nukleotidi za nickom. Podaljšanje primerja je metoda, ki se uporablja za odkrivanje določenega prepisa RNA iz zmesi ter količinsko opredelitev velikosti in količine zanimive RNA. To je razlika med prevajanjem vzdevka in podaljšanjem primerja.
