Ključna razlika - nitroceluloza proti najlonski membrani
Bloting je pomembna tehnika za odkrivanje določenih zaporedij DNA, RNA in beljakovin iz njihovih zmesi v molekularni biologiji. To se naredi z membrano, imenovano blot. Obstajajo različne tehnike blotiranja, kot so severno, južno in zahodno blotiranje. Izbira ustrezne membrane za postopek blotiranja je treba skrbno izvesti, da se prepreči nespecifična vezava in napačno zaznavanje. Nitroceluloza, najlon in PVDF so pogosto uporabljene membrane v tehnikah blotiranja. Imajo različne značilnosti. Ključna razlika med nitrocelulozo in najlonsko membrano je, da imajo nitrocelulozne membrane visok potencial za imobilizacijo beljakovin, medtem ko imajo najlonske membrane visok potencial za imobilizacijo nukleinske kisline. Vendar se obe vrsti membran pogosto uporabljata v tehnikah blotiranja.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je nitrocelulozna membrana
3. Kaj je najlonska membrana
4. Primerjava z drugimi - Nitroceluloza in najlonska membrana
5. Povzetek
Kaj je nitrocelulozna membrana?
Nitrocelulozna membrana je pogosto uporabljen membranski filter v tehnikah blotiranja nukleinske kisline in beljakovin. Ima visok potencial vezave na beljakovine. Zato se nitrocelulozne membrane pogosto uporabljajo v tehniki zahodnega blotiranja. Nitrocelulozne membrane so združljive z vsemi hibridizacijskimi tehnikami in imajo izjemno vezno sposobnost brez motenj. Nitrocelulozne membrane so po naravi hidrofilne. Vzpostavijo hidrofilno interakcijo z molekulami in jih učinkovito imobilizirajo na membrano. Komercialne nitrocelulozne membrane so na voljo v dveh velikostih por: 0,45 in 0,2 µm.
Slika 01: Nitrocelulozna membrana, ki se uporablja pri Western blot-u
Kaj je najlonska membrana?
Najlonska membrana je druga vrsta komercialne membrane, ki se uporablja v tehnikah blotiranja. Uporablja se tudi z nitroceluloznimi membranami za južno in severno blotiranje. Najlonske membrane so zaradi visoke afinitete do vezave na DNA idealne za južno blotiranje kot nitroceluloza. Zaradi več edinstvenih lastnosti najlonskih membran raziskovalci običajno uporabljajo najlonske membrane za južno in severno blotiranje namesto za nitrocelulozno membrano. Za odstranjevanje in odstranjevanje sonda priporočljive tudi najlonske membrane, za razliko od nitroceluloze.
Slika 02: Najlonska membrana, ki se uporablja za južno blotiranje
Kakšna je razlika med nitrocelulozo in najlonsko membrano?
Diff Article Sredina pred mizo
Nitroceluloza vs najlonska membrana |
|
| Nitrocelulozne membrane so krhke. | Najlonske membrane so manj krhke. |
| Ravnanje | |
| Z njimi je težko ravnati. | Z njimi je enostavno ravnati. |
| Očitanje | |
| Nepodprte nitrocelulozne membrane je težko preskusiti. | Z najlonskimi membranami je čiščenje enostavno. |
| Združljivost z različnimi pogoji shranjevanja | |
| Nitrocelulozne membrane imajo manj trdnosti, da prenesejo različne pogoje skladiščenja. | Najlonske membrane se močneje odzivajo na različne pogoje skladiščenja. |
| Uporaba | |
| Potrebno je predhodno vlaženje. | Za najlonske membrane predmočenje ni potrebno. |
| Hidrofilna narava | |
| Nitrocelulozne membrane so hidrofilne narave, vendar so manj hidrofilne kot najlonske membrane. | So zelo hidrofilne narave. |
| Potencial imobilizacije | |
| Nitrocelulozne membrane imajo manjšo afiniteto do nukleinskih kislin. Ima pa veliko afiniteto za beljakovine. | Najlonske membrane imajo z nukleinskimi kislinami visok potencial vezave kot nitrocelulozne membrane. |
Povzetek - Nitroceluloza vs najlonska membrana
Nitrocelulozne in najlonske membrane so posebni listi, ki se uporabljajo v blot tehniki za reprodukcijo vzorca trakov na gelu. Omogočajo možnost zaznavanja določenega zaporedja ali proteina iz mešanic z njihovo imobilizacijo na membrani. Ko se molekule imobilizirajo na membrani, jo lahko uporabimo kot substrat za hibridizacijsko analizo z označenimi sondami. Nitrocelulozna membrana se pogosto uporablja za odkrivanje beljakovin v Western blot tehniki zaradi visoke afinitete vezave na beljakovine. Najlonske membrane se pogosto uporabljajo za južno in severno blotiranje. To je razlika med nitrocelulozo in najlonsko membrano.
