Ključna razlika - SDS Page vs Western Blot
Western blot je tehnika, ki zazna določeno beljakovino iz vzorca beljakovin. Ta tehnika se izvaja v več ključnih korakih: elektroforeza v gelu, blotiranje in hibridizacija. Poliakrilamidna gela elektroforeza natrijevega dodecil sulfata (SDS Stran) je neke vrste tehnika elektroforeze v gelu, ki se uporablja za ločevanje beljakovin glede na njihovo velikost (molekulske mase). Western blot je poseben list blot-membrane, ki se uporablja za prenos enakega vzorca beljakovin na strani SDS. Ključna razlika med SDS Page in Western blot je, da SDS Page omogoča ločevanje beljakovin v zmesi, medtem ko Western blot omogoča zaznavanje in kvantifikacijo določenega proteina iz mešanice. Oboje je koristno pri študijah analize beljakovin.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je SDS Stran
3. Kaj je Western Blot
4. Primerjava ob strani - Stran SDS vs Western Blot
5. Povzetek
Kaj je SDS Stran?
SDS Page je tehnika elektroforeze v gelu, ki se uporablja za ločevanje beljakovin. Pogosto se uporablja v biokemiji, genetiki, forenziki in molekularni biologiji. Ko beljakovine ekstrahiramo iz vzorca, jih nanesemo na gel, sestavljen iz SDS in poliakrilamida. SDS je anionski detergent, ki se uporablja za linearizacijo beljakovin (denaturne beljakovine) in za oddajanje negativnega naboja lineariziranim beljakovinam, sorazmernim z njihovo molekulsko maso. Poliakrilamid postane trdna podlaga za gel. Denaturirani proteini, ki so negativno nabiti, se skozi gel selijo proti pozitivnemu koncu aparata. Glede na velikost beljakovin se hitrost selitve med beljakovinami razlikuje in pride do ločevanja. Stran SDS je zato koristna za ločevanje posameznih beljakovin glede na njihovo velikost.
Priprava poliakrilamidnega gela za frakcioniranje beljakovin je ključni korak pri SDS Page. Pravilna koncentracija poliakrilamida in vrsta uporabljenega zamreževalnega sredstva močno vplivata na fizikalne lastnosti gela, zaradi česar se dejansko ločijo različni proteini. Za učinkovito ločevanje je treba pravilno upravljati velikost por gela. Vendar pa SDS Page velja za tehniko ločevanja proteinov z visoko ločljivostjo.
Tehnika SDS Page ima veliko omejitev pri analizi beljakovin. Ker SDS denaturira beljakovine pred ločevanjem, ne omogoča zaznavanja encimske aktivnosti, interakcij vezave na beljakovine, beljakovinskih kofaktorjev itd.
Slika 01: Stran SDS
Kaj je Western Blot?
Western blot tehnika omogoča zaznavanje določene beljakovine iz beljakovinske mešanice ter merjenje količine in molekulske mase beljakovin. Western blot je membrana, ki se uporablja med postopkom blotiranja, da dobimo zrcalno sliko beljakovinskih vzorcev v poliakrilamidnem gelu SDS. Membrana, ki se uporablja za Western blot, je večinoma sestavljena iz nitroceluloze ali poliviniliden difluorida (PVDF). Membrano s preneseno beljakovino lahko uporabimo za identifikacijo želene beljakovine. Za odkrivanje želenih beljakovin s hibridizacijo potrebuje visokokakovostna protitelesa. Protitelo se veže na svoj specifični antigen in razkrije prisotnost želenega antigena, ki je beljakovina.
Prenos beljakovin iz poliakrilamidnega gela SDS v vestern blot izvedemo z elektroblotingom. Je učinkovita in hitra metoda, zaradi katere se beljakovine elektroforezirajo iz gela in preidejo na nitrocelulozno membrano (western blot).
Slika 02: Western blot
Kakšna je razlika med SDS Page in Western Blot?
Diff Article Sredina pred mizo
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page je tehnika elektroforeze v gelu. | Western blot je tehnika, ki se izvaja na membrani za odkrivanje določene beljakovine iz mešanice. |
| Uporaba | |
| Stran SDS omogoča ločevanje beljakovin glede na njihovo velikost. | Western blot omogoča prenos beljakovin na stranskem gelu SDS brez spreminjanja vzorca in omogoča hibridizacijo s specifičnimi protitelesi. |
| Slabosti | |
| Pomanjkljivosti te tehnike so denaturacija beljakovin, visoki stroški in prisotnost nevrotoksinskih kemikalij. | Ta tehnika je dolgotrajna in zahteva dobro izkušene osebne in posebne nadzorovane pogoje. |
Povzetek - Stran SDS proti Western Blot
Stran SDS in Western blot sta dve metodi, ki sodelujeta pri analizi beljakovin. Stran SDS omogoča enostavno ločevanje beljakovin na gelu glede na njihovo molekulsko maso. Western blot pomaga s hibridizacijo s specifičnimi protitelesi potrditi prisotnost in količino določenih beljakovin. To je razlika med SDS Page in Western blot.
