Ključna razlika - neposredni in posredni ELISA
Encimsko imunski test (ELISA), znan tudi kot encimski imunski test, je serološki test, ki zazna protitelesa v krvi. Uporablja se kot diagnostično orodje za ugotavljanje, ali je bil bolnik izpostavljen določeni vrsti virusa ali drugemu nalezljivemu povzročitelju (antigenu) in ali je telo proizvedlo protitelesa proti okužbi. ELISA lahko prepozna tudi pretekle in sedanje okužbe. Zato se ELISA pred poglobljeno analizo bolezni pogosto uporablja kot test pred presejanjem. Ta test se lahko opravi v laboratoriju z odvzemom vzorca krvi pacientu. Obstajata dve vrsti ELISA testa: neposredni ELISA in posredni ELISA test. Ključna razlika med neposrednim in posrednim ELISA je, da je posredni ELISA bolj občutljiv in zahteva dodajanje sekundarnega protitelesa, medtem ko je neposredni ELISA manj občutljiv in uporablja samo primarno protitelo.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je neposredni ELISA
3. Kaj je posredni ELISA
4. Primerjava - neposredna in posredna ELISA
5. Povzetek
Kaj je neposredna ELISA?
ELISA je diagnostični test bolezni, ki se izvaja za ugotavljanje prisotnosti določenih antigenov ali protiteles v krvi. Naredi se kot test na plošči. Uporablja protitelesa, povezana z enostavno testiranimi encimi. Prisotnost antigenov v vzorcu seruma se veže na specifična protitelesa, povezana z encimi. V zadnjem koraku se doda poseben substrat, ki reagira z encimom. Encim pretvori substrat v obarvan izdelek ali produkt, ki proizvaja signal. Sprememba barve kemičnega substrata razkrije prisotnost določenega protitelesa v vzorcu seruma. Neposredni test ELISA uporablja samo primarno protitelo, povezano z encimom. Po vezavi na antigen hitro spremeni barvo, kar kaže na prisotnost povzročitelja okužbe v krvi. Vendarintenziteta signalov je pri neposrednem ELISA šibkejša, saj so epitopi omejeni na vezavo antigenov. Zato je neposredni ELISA manj občutljiv v primerjavi s posrednim ELISA.
Slika 01: Neposredni test ELISA
Kaj je posredni ELISA?
ELISA se lahko izvede z uporabo dveh vrst protiteles, in sicer; primarno protitelo in sekundarno protitelo. Posredno orodje ELISA uporablja obe vrsti protiteles za ojačanje signalov za boljše odkrivanje. Posredna ELISA tehnika se izvaja na naslednji način.
- Plošče inkubiramo z antigeni in speremo, da blokiramo nespecifično vezavo.
- Nato dodamo in speremo primarna protitelesa.
- Dodamo in speremo encimsko vezana sekundarna protitelesa.
- Dodamo substrat in pustimo, da reagira z encimi.
- Zaznajo se signali in ugotovi prisotnost ali odsotnost specifičnega antigena v vzorcu.
Pri posrednem testu ELISA se lahko več sekundarnih protiteles veže na eno primarno protitelo. Sekundarna protitelesa so povezana z lahko testiranimi encimi. Zato lahko ena vezava povzroči močan signal zaradi več interakcij. Zato je posredni ELISA bolj občutljiv kot neposredni ELISA. Vendar posredni ELISA lahko daje nespecifične signale zaradi navzkrižnih reakcij sekundarnih protiteles.
Slika 02: Posredni test ELISA
Kakšna je razlika med neposrednim in posrednim ELISA?
Diff Article Sredina pred mizo
Neposredni in posredni ELISA |
|
| Neposredni ELISA je manj občutljiv v primerjavi s posrednim ELISA. | Posredni ELISA je bolj občutljiv. |
| Čas vzet | |
| Neposredni test ELISA je hiter postopek. | Posredni ELISA je zamuden. |
| Uporaba protiteles | |
| V neposrednem ELISA se uporablja samo ena vrsta protiteles (primarna protitelesa). | Za posredni ELISA se uporabljajo primarna in sekundarna protitelesa. |
| Povezava z encimi | |
| Primarna protitelesa so povezana z encimi. | Sekundarna protitelesa so povezana z encimi. |
| Navzkrižna reaktivnost drugih protiteles | |
| Neposredni ELISA odpravlja navzkrižno reaktivnost drugih protiteles. | Na posredni ELISA vpliva navzkrižna reaktivnost drugih protiteles. |
| Signali | |
| Signali so v primerjavi s posrednimi ELISA šibki. | Signali so ojačani s posrednim ELISA. Zato ga je enostavno zaznati. |
Povzetek - Neposredni in posredni ELISA
ELISA je biokemična tehnika, ki se uporablja predvsem v imunologiji za odkrivanje prisotnosti protitelesa ali antigena v vzorcu krvi bolnika. Lahko se izvede z dvema postopkoma, znanima kot neposredni ali posredni ELISA. Neposredni test ELISA uporablja samo primarna protitelesa za odkrivanje antigena, medtem ko posredni ELISA uporablja tako primarna kot sekundarna protitelesa. Pri neposrednem ELISA so primarna protitelesa označena, pri posrednih ELISA pa sekundarna protitelesa. To je razlika med neposrednim in posrednim ELISA.
