Ključna razlika - ekstrakcija DNA v primerjavi z RNA
Preučevanje DNK in RNK je bistvenega pomena za razumevanje osnovnih konceptov molekularne biologije, biotehnologije in genetike. Za izvajanje eksperimentalnih postopkov med temi študijami so potrebni ekstrakti čistih vzorcev DNA in RNA. Ključna razlika med ekstrakcijo DNA in RNA je v tem, da postopek ekstrakcije DNA očisti DNA, medtem ko ekstrakcija RNA očisti RNA. Postopek ekstrakcije DNA ima tri različne stopnje: lizo celic in katabolizem membranskih lipidov in beljakovin, strjevanje katabolitov s koncentrirano raztopino soli in obarjanje DNA z etanolom. Postopek v treh korakih je lahko sestavljen iz dveh neobveznih korakov. Postopek čiščenja RNA je sestavljen iz štirih različnih stopenj: dodajanje gvanidijevega tiocianata za lizo celic, denaturacija beljakovin, vključno z ribonukleazami,ločevanje RNA z dodatkom kloroforma in fenola ter izpiranje oborine z etanolom.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je ekstrakcija DNK
3. Kaj je ekstrakcija RNK
4. Podobnosti med ekstrakcijo DNK in RNK
5. Vzporedna primerjava - ekstrakcija DNA v primerjavi z RNA v obliki tabele
6. Povzetek
Kaj je ekstrakcija DNA?
Ekstrakcija DNK je fizikalni in kemijski postopek, ki se uporablja za čiščenje DNK iz vzorca. Ekstrakcija DNA je pomemben vidik v kontekstu molekularne biologije in forenzičnih znanosti. Postopek je sestavljen iz treh osnovnih korakov. Sprva je treba pridobiti celice, ki nas zanimajo. Nato je olajšana liza celic, da se razbije celična membrana, ki odpre celico in izpostavi citoplazmo skupaj z DNA. Površinsko aktivne snovi ali druge detergente lahko uporabimo za liziranje lipidov iz celične membrane, medtem ko prisotne beljakovine katalizirajo proteaze. To je neobvezen korak. Ko je celica lizirana, kopičenje kataboliziranih molekul olajša koncentrirane raztopine soli. Sledi centrifugiranje raztopine, ki loči ostanke drobcev od DNA. V tej fazidiferencirana DNA se pomeša z reagenti in solmi, uporabljenimi med celičnim ciklusom.
Slika 01: Ekstrakcija DNA
Za nadaljnje čiščenje bi lahko uporabili naslednje korake. Ena metoda je obarjanje etanola, ki vključuje mešanje ledeno hladnega etanola z ločenim vzorcem DNA. DNA ni topna v alkoholu in s tem ustvari pelete zaradi združevanja molekul DNA skupaj. V tem postopku dodamo natrijev acetat, da povečamo stopnjo padavin s povečanjem ionske jakosti. Poleg postopka obarjanja etanola je za to mogoče spodbuditi tudi postopek ekstrakcije fenol-kloroforma. Pri tej metodi fenol denaturira beljakovine v vzorcu. Ko se denaturirani proteini centrifugirajo, ostanejo v organski fazi, molekule DNA, ki so zmešane s kloroformom, pa bodo prisotne v vodni fazi. Kloroform bo odstranil ostanke fenola. Ko je ekstrakcija končana,DNA se hrani raztopljena v TE pufru ali ultra čisti vodi.
Kaj je ekstrakcija RNA?
Čiščenje RNA je postopek, s katerim se RNA očisti iz biološkega vzorca. Zaradi prisotnosti ribonukleaze v celicah in tkivih je ta postopek zapleten. Encim ribonukleaza lahko hitro razgradi RNA. Kemična narava ribonukleaz je izredno stabilna in jih je težko inaktivirati. Možna je nevtralizacija ribonukleaz. Ker je ta encim povsod prisoten v celicah in tkivih, so razvite posebne tehnike za ekstrakcijo RNA. Med številnimi metodami je skupna metoda ekstrakcija gvanidinij tiocinat-fenol-kloroform.
Slika 02: Ekstrakcija RNA
Metoda ekstrakcije gvanidinij tiocinat-fenol-kloroform je odvisna od centrifugiranja in ločevanja faz. Zmes, ki jo je treba centrifugirati, je sestavljena iz vodnega vzorca in z vodo nasičene raztopine, ki sta sestavljena iz fenola in kloroforma. Ko je raztopina centrifugirana, sestoji iz zgornje vodne faze in spodnje organske faze v nevtralnih pogojih pH (pH 7-8). RNA je prisotna v vodni fazi. Organska faza je običajno sestavljena iz beljakovin, raztopljenih v fenolu, in lipidov, raztopljenih v kloroformu. Doda se kaotropno sredstvo (molekula, ki ima sposobnost prekiniti vodikove vezi med molekulami vode); to je znano kot gvanidinij tiocianat. To sredstvo ima sposobnost denaturacije proteinov, ki vključujejo ribonukleaze, ki lahko razgradijo RNA, in sodeluje pri lizi celic. Ločuje tudi rRNA od ribosomskih proteinov. Zadnji korak čiščenja RNA je izpiranje oborine vodne faze z etanolom. RNA bi lahko očistili tudi s tekočim dušikom.
Kakšne so podobnosti med ekstrakcijo DNA in RNA?
- Pri obeh postopkih ekstrakcije se uporabljajo škodljive kemikalije, kot sta fenol in kloroform.
- Centrifugiranje je bistvena tehnika za oba procesa.
- Etanol se uporablja za izpiranje oborine in pridobivanje prečiščene DNA ali RNA.
Kakšna je razlika med ekstrakcijo DNA in RNA?
Diff Article Sredina pred mizo
DNA vs ekstrakcija RNA |
|
| Ekstrakcija DNK je postopek, s katerim se DNK izloči iz organizma ali vzorca. | Ekstrakcija RNA je postopek, ki RNA izloči iz vzorca. |
| Koraki | |
| Postopek ekstrakcije DNA je sestavljen iz treh različnih korakov z dvema neobveznima korakoma. | Postopek ekstrakcije RNA je sestavljen iz štirih različnih korakov. |
| Reagenti | |
| Za ekstrakcijo DNA se uporabljajo površinsko aktivne snovi, proteaze (neobvezno), alkohol, kloroform, fenol, natrijev acetat. | Za ekstrakcijo RNK se uporabljajo gvanidijev tiocianat, kloroform, fenol in etanol. |
Povzetek - DNA vs ekstrakcija RNA
Ekstrakcija DNA in RNA sta ključna vidika eksperimentalnih postopkov za preučevanje molekularne biologije, genetike in biotehnologije. Oba postopka vključujeta podobne reagente, toda za ekstrakcijo RNA se uporablja poseben reagent, znan kot Guanidij tiocianat, ki zmanjšuje aktivnost ribonukleaz. To je glavna razlika med ekstrakcijo DNA in RNA.
Prenesite PDF različico ekstrakcije DNA vs RNA
Lahko prenesete različico tega članka v obliki PDF in jo uporabite za uporabo brez povezave, kot je navedeno v opombi. Prosimo, prenesite PDF različico tukaj Razlika med ekstrakcijo DNA in RNA
