Ključna razlika - vodoravna in navpična elektroforeza v gelu
Gelna elektroforeza je laboratorijska tehnika, ki se uporablja v genetiki za ločevanje zmesi, ki vsebujejo DNA, RNA in druge beljakovine glede na njihov naboj in molekulsko velikost. DNA, RNA ali beljakovine, ki jih je treba pri tej metodi ločiti, se skozi gel, ki vsebuje majhne pore. Molekule skozi gel poganja električno polje. Molekule prehajajo skozi pore gela in hitrost gibanja je obratno sorazmerna njihovi dolžini. Zato se bodo molekule z nižjo molekulsko velikostjo gibale hitreje kot molekule z večjo molekulsko maso. Električno polje ustvarja razlika v naboju na dveh koncih gela. En konec vsebuje pozitiven naboj, drugi konec pa negativni naboj. Ker so molekule DNA in RNA negativno nabite,privlačili jih bodo proti pozitivno napolnjenemu koncu gela. Gelna elektroforeza je lahko na dva različna načina: vodoravna gelna elektroforeza in vertikalna gelna elektroforeza. Pri vodoravni gelski elektroforezi je gel prisoten v vodoravni smeri in je potopljen v neprekinjen pufer, ki je prisoten v sami škatli z gelom. Pri navpični gelni elektroforezi je puferski sistem usmerjen navpično in je prekinjen z dvema komorama, ki sta na vrhu in na dnu s katodo oziroma anodo. To je ključna razlika med vodoravno in navpično gel elektroforezo.gel je prisoten v vodoravni smeri in je potopljen v neprekinjen odbojnik, ki je prisoten znotraj same škatle z gelom. Pri navpični gelni elektroforezi je puferski sistem usmerjen navpično in je prekinjen z dvema komorama, ki sta na vrhu in na dnu s katodo oziroma anodo. To je ključna razlika med vodoravno in navpično gelno elektroforezo.gel je prisoten v vodoravni smeri in je potopljen v neprekinjen odbojnik, ki je prisoten znotraj same škatle z gelom. Pri navpični gelni elektroforezi je puferski sistem usmerjen navpično in je prekinjen z dvema komorama, ki sta na vrhu in na dnu s katodo oziroma anodo. To je ključna razlika med vodoravno in navpično gelno elektroforezo.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je vodoravna gelska elektroforeza
3. Kaj je navpična elektroforeza v gelu
4. Podobnosti med vodoravno in navpično elektroforezo v gelu
5. Primerjava med seboj - horizontalna in navpična elektroforeza v tabeli v obliki
6. Povzetek
Kaj je vodoravna gelska elektroforeza?
Horizontalna elektroforeza v gelu uporablja osnovno teorijo za ločevanje molekul DNA, RNA ali beljakovin glede na njihovo molekularno velikost in naboj. Pri tej tehniki je gel prisoten v vodoravni smeri in potopljen v neprekinjen pufer. Agarozni gel se uporablja za ločevanje škatle z gelom v dva predelka. En konec škatle z gelom vsebuje anodo, drugi konec pa katodo. Ko se uporabi tok, medpomnilnik, uporabljen v tej tehniki, omogoča ustvarjanje gradienta naboja. Ko se napolni, se gel ponavadi segreje. Pufer deluje tudi kot hladilno sredstvo, ki ohranja temperaturo na optimalni ravni. Recirkulacija tekočega pufra preprečuje nastanek gradienta pH. Diskontinuirnega puferskega sistema ni mogoče uporabiti pri vodoravni gelski elektroforezi, ker sta oba predela gelskega sistema povezana s tekočim pufrom. Akrilamid se uporablja med gelno elektroforezo za ločevanje beljakovinskih mešanic.
Slika 01: Horizontalna elektroforeza v gelu
Pri vodoravni gelski elektroforezi akrilamida ni mogoče uporabiti, ker je škatla z gelom izpostavljena kisiku. Zaradi prisotnosti kisika je zavirana polimerizacija akrilamida, kar ovira tvorbo gela. Horizontalna gelska elektroforeza je enostavna metoda, ki se uporablja pri ločevanju DNA in RNA.
Kaj je vertikalna elektroforeza v gelu?
Tehnika vertikalne elektroforeze v gelu deluje v skladu s primarno teorijo gelske elektroforeze, vendar velja za bolj zapleteno od metode vodoravne gelne elektroforeze. Ta tehnika uporablja diskontinuirni pufer. Katoda je v zgornji komori, anoda pa v spodnji komori. Elektrode v vsakem oddelku zagotavljajo zahtevano električno polje. Med nameščenima steklenima ploščama se vlije tanek sloj gela. Zato je zgornji del gela potopljen v zgornjo komoro, spodnji del gela pa je potopljen v komoro na dnu. Ko se uporabi tok, se majhen del pufra premakne v spodnjo komoro iz zgornje komore skozi gel. Tok, ki se uporablja v tej tehniki, je minutnih enot.
Slika 02: Vertikalna elektroforeza v gelu
Pri navpični gelski elektroforezi pufer teče samo skozi gel. To omogoča natančen nadzor gradienta napetosti v fazi ločevanja. Akrilamidni gel lahko uporabimo, ker predelki niso izpostavljeni atmosferskemu kisiku. Zaradi manjše velikosti por akrilamidnega gela je mogoče doseči natančno ločevanje z višjo ločljivostjo.
Kakšne so podobnosti med vodoravno in navpično elektroforezo v gelu?
- Oba sistema delujeta v skladu z osnovno teorijo gelske elektroforeze.
- Anoda in katoda se uporabljata za zagotavljanje zahtevanega električnega polja v obeh sistemih.
Kakšna je razlika med vodoravno in navpično elektroforezo v gelu?
Diff Article Sredina pred mizo
Horizontalna vs vertikalna gelska elektroforeza |
|
| Horizontalna elektroforeza v gelu je tehnika elektroforeze v gelu, pri kateri je gel prisoten v vodoravni usmeritvi. | Vertikalna elektroforeza v gelu je tehnika elektroforeze v gelu, pri kateri je gel usmerjen navpično. |
| Odbojnik | |
| Horizontalna gelska elektroforeza je sestavljena iz neprekinjenega pufra. | Tekoči pufer je v vertikalni gelski elektroforezi prekinjen. |
| Uporaba akrilamida | |
| Akrilamida ni mogoče uporabiti za vodoravno gelsko elektroforezo, ker je škatla z gelom izpostavljena atmosferskemu kisiku. | Ker gel zaradi dveh ločenih komor ni izpostavljen atmosferskemu kisiku, bi lahko akrilamid uporabili za vertikalno elektroforezo v gelu. |
| Funkcija | |
| Vodoravna gelna elektroforeza se pogosteje uporablja za ločevanje zmesi DNA in RNA, ne pa tudi beljakovin. | Vertikalna gelna elektroforeza se uporablja za ločevanje mešanic beljakovin. |
Povzetek - Elektroforeza v vodoravnem in navpičnem gelu
Gelna elektroforeza je laboratorijska tehnika, ki se pogosto uporablja pri ločevanju zmesi, ki vsebujejo molekule DNA, RNA in beljakovin. Obstajata dve metodi gelne elektroforeze: vodoravna in navpična gel elektroforeza. Pri vodoravni gelski elektroforezi je tekoči pufer neprekinjen, medtem ko je pri vertikalni gelski elektroforezi prekinjen. To je razlika med vodoravno in navpično elektroforezo v gelu. Oba sistema delujeta po skupnem principu gelske elektroforeze.
Prenesite PDF različico elektroforeze Horizontal vs Vertical Gel
Lahko prenesete različico tega članka v obliki PDF in jo uporabite za uporabo brez povezave, kot je navedeno v opombi. Prosimo, prenesite različico PDF tukaj Razlika med vodoravno in navpično elektroforezo v gelu.
