Ključna razlika - kapilarna elektroforeza proti gelski elektroforezi
Elektroforeza je tehnika, ki se uporablja za ločevanje biomolekul glede na naboj delcev, velikost delcev in obliko delcev. Migracija molekule, znana kot elektroforetska mobilnost, je odvisna od vrste uporabljenega polimera / gela, njegove velikosti por, predvidene napetosti, časa delovanja in razmerja med površino in prostornino. Obstajajo različne vrste tehnik elektroforeze, ki temeljijo na vrsti uporabljene biomolekule. Prva vrsta elektroforeze, ki jo je izumil, je bila elektroforeza iz papirja, pri kateri je bil nitrocelulozni papir uporabljen kot medij za ločevanje biomolekul. Načelo gelne elektroforeze, kjer so bili za ločevanje biomolekul uporabljeni različni geli velikosti por, je bilo izumljeno kasneje. Tehnika gelske elektroforeze je bila nadalje prilagojena za izboljšanje natančnosti tehnike, ena izmed takšnih sprememb pa je kapilarna elektroforeza. Ključna razlika med kapilarno elektroforezo in gelsko elektroforezo je, da se elektroforeza v gelu izvaja v navpični ali vodoravni ravnini z uporabo polimernega gela standardne velikosti por, medtem ko se kapilarna elektroforeza izvaja v kapilarni cevi s polimerno tekočino ali gelom.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je gelska elektroforeza
3. Kaj je kapilarna elektroforeza
4. Podobnosti med kapilarno elektroforezo in gelsko elektroforezo
5. Vzporedna primerjava - kapilarna elektroforeza v primerjavi z gelsko elektroforezo v tabelarni obliki
6. Povzetek
Kaj je elektroforeza v gelu?
Gelna elektroforeza je tehnika, ki se uporablja za ločevanje predvsem nukleinskih kislin, beljakovin ali aminokislin glede na naboj, velikost in obliko. Ta tehnika kot ločevalni medij uporablja fizični gel, ki je polimerna snov. Najpogosteje uporabljena gela sta agaroza (za ločevanje nukleinskih kislin) in poliakrilamid (za ločevanje beljakovin). Gelni elektroforetski aparat vsebuje pladenj za ulivanje gela za pripravo gela, livarske glavnike za pripravo vdolbinic, varovalni rezervoar, pozitivne elektrode (anoda) in negativa (katoda) ter napajalno enoto. Molekule, kot sta DNA ali RNA, ki sta negativno nabiti, se s katode premaknejo na anodo, molekule s pozitivnim nabojem pa obratno. Priprava gela se opravi v skladu z zahtevo. Če je potrebna visoka ločljivost ali ločitev molekul,pripraviti je treba gel z visoko koncentracijo z manjšo velikostjo por. Molekule, ločene na gelski matrici, opazujemo po tehniki obarvanja. Ločene molekule se na matriksu gela pojavijo kot trakovi.
Slika 01: Gel elektroforeza
Gelna elektroforeza se uporablja v molekularni diagnostiki, kot je odvzem prstnih odtisov DNA, da se ugotovi prisotnost določenega fragmenta DNA / RNA ali proteina. Gelna elektroforeza določa tudi čistost ekstrahiranega vzorca biomolekule. Gelna elektroforeza se izvaja kot predhodni korak za v in hibridizacijo in kot potrditvena analiza po zaporedju.
Kaj je kapilarna elektroforeza?
Kapilarna elektroforeza je modifikacija gelne elektroforeze, ki uporablja enak princip ločevanja glede na naboj, velikost molekule, vendar se izvaja v kapilarni epruveti bodisi z gelsko snovjo ali tekočim polimerom. Kapilare so pripravljene iz taljenega silicijevega dioksida in vsaka kapilarna cev ima notranji premer 50-100μm in je dolga 25-100cm. Vzorci se vbrizgajo v kapilarno cev, ki vsebuje polimerni material, in se ločijo veliko hitreje kot običajna gelna elektroforeza. Kapilarni sistem je dobro zaščiten znotraj izolacijskega plašča, ki ščiti vzorec pred kakršno koli kontaminacijo. Kapilare lahko napolnimo s tekočimi polimeri, kot je hidroksietil celuloza, ali geli z visoko ločljivostjo, kot je poliakrilamid. Kapilarna elektroforeza zagotavlja večjo ločljivost; zato je ločevanje natančnejše. Kapilarna elektroforeza uporablja avtomatiziran detektorski sistem s spektrofotometrično analizo. To je posledica večjega razmerja med površino in prostornino.
Slika 02: Kapilarna elektroforeza
Kapilarna elektroforeza se uporablja v situacijah, kot je forenzika, kjer je potrebna večja natančnost in se pogosto ne uporablja, saj je draga tehnika.
Kakšne so podobnosti med kapilarno elektroforezo in gelsko elektroforezo?
- Ločevanje molekul v obeh tehnikah temelji na naboju in velikosti molekule.
- Obe tehniki lahko uporabimo za ločevanje tako nukleinskih kislin kot beljakovin.
- Obseg vzorca obeh tehnik je enak.
- Obe tehniki uporabljata pufer za lažje ločevanje.
Kakšna je razlika med kapilarno elektroforezo in gelsko elektroforezo?
Diff Article Sredina pred mizo
Kapilarna elektroforeza vs gelska elektroforeza |
|
| Kapilarna elektroforeza je tehnika, ki ločuje biomolekule na kapilarni cevi z uporabo tekočega ali gelnega polimernega medija. | Gelna elektroforeza je tehnika, ki ločuje biomolekule na navpični ali vodoravni ravnini z uporabo polimernega gelskega medija. |
| Ločitev | |
| Pri kapilarni elektroforezi se ločevanje opravi znotraj kapilarne cevi. | Pri gelski elektroforezi se ločevanje izvede na navpični ali vodoravni ravnini. |
| Medij ločevanja | |
| Tekoči polimeri, kot je hidroksietilceluloza, se uporabljajo pri kapilarni elektroforezi. | Geli, bodisi agaroza bodisi poliakrilamid, se uporabljajo kot gojišče v gelski elektroforezi. |
| Prečna povezava | |
| Visoko ločljivost lahko dobimo s kapilarno elektroforezo. | Ločljivost je nizka pri gelni elektroforezi. |
| Razmerje med površino in prostornino | |
| Pri kapilarni elektroforezi je razmerje med površino in volumnom visoko. | Razmerje med površino in prostornino je pri elektroforezi v gelu nizko. |
| Tehnika zaznavanja | |
| Zaznavanje poteka s spektrofotometričnimi avtomatiziranimi detektorji v kapilarni elektroforezi. | Barvanje in opazovanje z UV-transilluminatorjem se izvajata kot tehnike zaznavanja v elektroforezi v gelu. |
Povzetek - Kapilarna elektroforeza vs gelska elektroforeza
Molekularna diagnostika igra pomembno vlogo v znanstvenem svetu. Identifikacija in čiščenje DNA, RNA in beljakovin sta ključna koraka v diagnostičnih postopkih. Elektroforeza je tehnika, ki ločuje in identificira biomolekule tako v gelski elektroforezi kot v zelo napredni kapilarni gelski elektroforezi. Gelna elektroforeza se izvaja v navpični ali vodoravni ravnini s polimernim gelom standardne velikosti por, medtem ko se kapilarna elektroforeza izvaja v kapilarni cevi s polimerno tekočino ali gelom. To je razlika med kapilarno elektroforezo in gelsko elektroforezo. Po končani tehniki elektroforeze se biomolekule nadalje obdelajo, da pridobijo informacije na višji ravni s hibridizacijo ali s tehnikami, kot je odvzem prstnih odtisov.
Prenesite PDF različico kapilarne elektroforeze proti gelski elektroforezi
Lahko prenesete različico tega članka v obliki PDF in jo uporabite za uporabo brez povezave, kot je navedeno v opombi. Prenesite različico PDF tukaj Razlika med gelsko elektroforezo in kapilarno elektroforezo.
