Ključna razlika - imunofluorescenca proti imunohistokemiji
Diagnostika bolezni, ki uporablja molekularno biološke metode, je postala novo področje klinične laboratorijske tehnologije. Vključuje vse teste in metode za prepoznavanje bolezni in razumevanje vzroka bolezni z analizo DNA, RNA ali izraženih beljakovin v organizmu. Hiter napredek molekularne diagnostike je omogočil osnovne raziskave nalezljivih in nenalezljivih bolezni. Uporabljajo se za določanje sprememb v zaporedju ali ravni izražanja v ključnih genih ali beljakovinah, ki sodelujejo pri bolezni. Imunofluorescenca (IF) in imunohistokemija (IHC) sta dve tako pogosto uporabljeni tehniki v biologiji raka. IF je vrsta IHC, pri kateri se za analizo monoklonskih in poliklonskih protiteles uporablja metoda odkrivanja fluorescence, medtem ko IHC uporablja metode za odkrivanje monoklonskih in poliklonskih protiteles na osnovi kemikalij. To je ključna razlika med IF in IHC.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je imunofluorescenca
3. Kaj je imunohistokemija
4. Podobnosti med imunofluorescenco in imunohistokemijo
5. Vzporedna primerjava - imunofluorescenca proti imunohistokemiji v tabelarni obliki
6. Povzetek
Kaj je imunofluorescenca (IF)?
Imunofluorescenca je tehnika detekcije, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena z uporabo fluorescenčnih barvil ali fluorescentnih proteinov za namen detekcije. Označena sekundarna protitelesa lahko povzročijo neželene signale v ozadju; zato tehnika IF temelji na označevanju samega primarnega protitelesa, da bi se izognili neželenim signalom med odkrivanjem. S to tehniko preprečimo nespecifično vezavo med primarnim in sekundarnim protitelesom in je hitrejša, saj ni vključena nobena stopnja sekundarne inkubacije. Izboljšana je tudi kakovost podatkov.
Slika 01: Dvojno imunofluorescenčno obarvanje za BrdU, NeuN in GFAP
Fluorokromi ali fluorescenčna barvila so spojine, ki lahko absorbirajo sevanje, po možnosti ultravijolično sevanje, ki je vzbujeno. Ko delci iz vzbujenega stanja dosežejo osnovno stanje, oddajajo sevanje, ki ga detektor zajame in zazna, da tvori spekter. Zelo pomembno je, da je fluorescenčna nalepka združljiva in stabilna za določeno reakcijo in jo je treba pravilno konjugirati s protitelesom, da dobimo natančne rezultate. Eden najpogosteje uporabljenih fluorokromov je fluorescein izotiocianat (FITC), ki je zelene barve z absorpcijskimi in valovnimi dolžinami emisije 490 nm oziroma 520 nm. Rhodamin, drugo sredstvo, ki se uporablja v IF, je rdeče barve in ima izrazito valovno dolžino absorpcije in emisije 553 nm in 627 nm.
Kaj je imunohistokemija (IHC)?
IHC je molekularna preskusna metoda, ki se izvaja za identifikacijo in potrditev prisotnosti antigena v ciljni celici. Ciljna celica je lahko nalezljivi delci, mikrobni patogen ali maligna tumorska celica. IHC uporablja monoklonska in poliklonska protitelesa za ugotavljanje prisotnosti antigenov, prisotnih na celični površini ciljnih celic. Tehnika temelji na vezavi antigen-protitelo. Na ta protitelesa je konjugiran detekcijski marker, da se zazna prisotnost ali odsotnost določenega antigena. Ti markerji so lahko kemični markerji, kot so encimi, fluorescentno označena protitelesa ali radioaktivno označena protitelesa.
Slika 02: Rez miši in možganov, obarvan z imunohistokemijo
Najbolj priljubljena uporaba IHC je v biologiji rakavih celic za ugotavljanje prisotnosti malignih tumorjev, uporablja pa se tudi za odkrivanje nalezljivih bolezni.
Kakšne so podobnosti med imunofluorescenco in imunohistokemijo?
- Imunofluorescenca in imunohistokemija potekata v pogojih in vitro.
- Obe tehniki temeljita na antigenu-protitelesu
- Obe sta zelo hitri tehniki.
- Rezultati tehnik so ponovljivi.
- Oba sta izboljšala kakovost podatkov.
- Te tehnike se uporabljajo pri diagnostiki raka in nalezljivih bolezni.
Kakšna je razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo?
Diff Article Sredina pred mizo
Imunofluorescenca vs imunohistokemija |
|
| IF je tehnika detekcije, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena z uporabo fluorescenčnih barvil ali fluorescentnih proteinov za detekcijo. | IHC je tehnika odkrivanja, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena s kemikalijami ali radioaktivnimi elementi za odkrivanje. |
| Natančnost | |
| Natančnost je večja pri tehniki IF v primerjavi z IHC. | Natančnost je pri IHC nižja. |
| Specifičnost | |
| IF je bolj natančen. | IHC je manj specifičen. |
Povzetek - Imunofluorescenca vs imunohistokemija
Molekularni mehanizmi so povzročili številne spremembe na področju medicine, kar je povzročilo napredne molekularne metode testiranja, ki so povzročile revolucije na področju diagnostike. Ti izumi so privedli do hitre in natančne identifikacije in potrditve bolezni ter s tem omogočili uspešno dajanje in proizvodnjo zdravil. Te tehnike se uporabljajo tudi v farmakologiji, da bi našli cilje zdravil in potrdili farmakokinetične lastnosti zdravila med presnovo zdravila. IF in IHC sta dve diagnostični metodi, ki temeljita na konceptu vezave antigena in protiteles, čeprav se način detekcije pri obeh tehnikah razlikuje. IF uporablja princip fluorescence za odkrivanje antigena, IHC pa koncept kemijske konjugacije za odkrivanje antigena. To je razlika med IF in IHC.
Prenesite PDF različico Imunofluorescenca vs imunohistokemija
Lahko prenesete različico tega članka v obliki PDF in jo uporabite za uporabo brez povezave, kot je navedeno v opombi. Prosimo, prenesite PDF različico tukaj Razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo.
