Ključna razlika - YAC proti M13 Phage Vector
Kloniranje DNA je pomemben postopek, ki omogoča razmnoževanje pomembnih fragmentov DNA organizmov. Zahteva povezovanje specifične DNA z vektorsko DNA, da se ustvari rekombinantna DNA, ki se pretvori v gostiteljski organizem. Vektor je molekula DNA, ki se obnaša kot nosilec tujega genskega materiala v drugo celico ali organizem. Moral bi se razmnoževati v gostiteljskem organizmu in proizvajati več kopij rekombinantne DNA. Pri kloniranju DNA se uporabljajo različne vrste vektorjev. Umetni kromosom kvasovk (YAC) in vektor faga M13 sta med njimi dve vrsti. Ključna razlika med faktorskim vektorjem YAC in M13 je, da je YAC umetni kromosom, ki se razmnožuje v kvasnih celicah, medtem ko je fagovski vektor M13 enojna verižna krožna DNA bakteriofaga M13, ki se razmnožuje v celicah E Coli.
VSEBINA
1. Pregled in ključna razlika
2. Kaj je YAC
3. Kaj je M13 Phage Vector
4. Primerjava - YAC proti M13 Phage Vector
5. Povzetek
Kaj je YAC Vector?
YAC je umetno zgrajen kromosom, ki ima sposobnost prenašanja velikega segmenta tuje DNA in replikacije znotraj kvasnih celic. Ima centromere, telomere in avtonomno replicirajoča zaporedja, ki so bistvena za razmnoževanje in stabilnost. YAC mora imeti tudi selektivni marker ali označevalce in mesta omejitve, da postane učinkovit vektor kloniranja. Velike sekvence od 1000 kb do 2000 kb lahko vstavimo v YAC in prenesemo v kvas.
Slika 01: Vektor YAC
Kaj je M13 Phage Vector?
Bakteriofag M13 je virus, ki okuži in se razmnoži v E Coli. Genom bakterije M13 je majhen, približno 6,7 kb. Je enoverižna, krožna in pozitivno občutljiva DNA. Ta virus posebej okuži bakterije E Coli preko F pilus. Ko ssDNA vstopi v bakterijo, sintetizira njen komplementarni sklop in postane dsDNA ali replikativna oblika (RF) M13. RF se lahko v gostiteljskem organizmu obnaša kot plazmid. DsDNA se razmnožuje znotraj E Coli in tvori ssDNA, ki nosi nove fage. Ti novi fagi se neprekinjeno sproščajo iz E Coli, ne da bi ubili gostiteljsko celico. Vendar okužba upočasni rast E Coli. dsDNA lahko ekstrahiramo iz bakterijskih celic in uporabimo kot vektorje pri kloniranju DNA. Znani so kot vektorji fagov M13. Z njimi je mogoče enostavno manipulirati in jih uporabljati podobno kot s plazmidnimi vektorji.
Inherentna sposobnost okužbe teh fagov M13 je dobra kvalifikacija za uporabo kot vektor pri kloniranju genov. Pri razvoju M13 v vektor je treba v njegov genom vključiti več elementov. To so gen za beljakovine lac represorja (lac I), proksimalno območje gena lac Z gena, promotor lac in večkratno mesto kloniranja (polilinker). Kadar se dsDNA M13 uporablja kot vektorje, jo lahko obravnavamo kot plazmidni vektor. Vendar ima uporaba ssDNA M13 prednosti pri zaporedju DNA in mutagenezi, usmerjeni na mesto.
Ker ima fag-vektor M13 več klonirnih mest v območju lacZ, lahko rekombinirane vektorje zlahka prepoznamo s presejanjem modro-bele kolonije na agarnih ploščah, ki vsebujejo IPTG in X-Gal. Modre plošče, proizvedene na ploščah, ne vsebujejo rekombiniranih fagov. Zato lahko za kloniranje izberemo fage z vložki.
Slika 02: Bakteriofag M13
Kakšna je razlika med YAC in M13 Phage Vector?
Diff Article Sredina pred mizo
YAC proti M13 Phage Vector |
|
| YAC je gensko spremenjen kromosom, ki lahko nosi velik del tuje DNA in se razmnožuje znotraj kvasnih celic. | Fagijski vektor M13 je virusni vektor, ki ga je razvil bakteriofag M13 in se uporablja za vstavljanje tuje DNA v E Coli. |
| Namen | |
| YAC so bili zasnovani za kloniranje velikih fragmentov genomske DNA v kvas. | Vektorji fagov M13 se uporabljajo za vstavljanje tuje DNA v E Coli. |
| Dolžina vstavka | |
| YAC lahko vsebujejo genomske vložke velikosti megabaze (1000 kb - 2000 kb). | Velikost vložkov je približno 1500 bps. |
| Gradnja | |
| DNK YAC je težko očistiti nedotaknjeno in zahteva visoko koncentracijo za ustvarjanje vektorskega sistema YAC. | Pojavi se preko ciklične fotosintetske elektronske verige. |
| Stabilnost | |
| YAC je nestabilen. | Fage M13 je mogoče enostavno pridobiti. |
| Velikost | |
| Encimi so večje molekule. | Fagi M13 so stabilni kot YAC. |
Povzetek - YAC proti M13 Phage Vector
YAC je umetno zgrajen vektorski sistem, ki uporablja določeno regijo kvasnega kromosoma za vstavljanje velikih segmentov genskega materiala v kvasne celice. Vektor faga M13 je vektorski sistem, pridobljen iz bakteriofaga M 13, ki kot gostiteljski organizem uporablja E coli. To je glavna razlika med YAC in M13 Phage Vector. Oba sta enako uporabna pri tehnologiji rekombinantne DNA in kloniranju genov.
