Razlika Med AFLP In RFLP

2024 Avtor: Mildred Bawerman | [email protected]. Nazadnje spremenjeno: 2023-12-16 08:42

Ključna razlika - AFLP vs RFLP

Študije DNK imajo izjemen pomen pri razumevanju in določanju filogenetskih razmerij, diagnosticiranju genskih bolezni in kartiranju genomov organizma. Za identifikacijo določenega gena ali zaporedja DNA v skupini neznanih DNA se uporablja tudi več tehnik, povezanih z analizo DNA. Znani so kot molekularni markerji. Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) in Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) sta dva takšna molekularna markerja (metode), razvita v molekularni biologiji za odkrivanje genskih razlik med organizmi. Obe metodi sta enako pomembni in imata prednosti in slabosti. Ključna razlika med AFLP in RFLP je v tem, da AFLP vključuje selektivno PCR amplifikacijo prebavljene DNA, medtem ko RFLP ne vključuje selektivne PCR amplifikacije fragmentov DNA.

VSEBINA

1. Pregled in ključna razlika

2. Kaj je AFLP

3. Kaj je RFLP

4. Vzporedna primerjava - AFLP vs RFLP

5. Povzetek

Kaj je AFLP?

AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) je pomembno orodje v molekularni biologiji in se pogosto uporablja pri analizi genetskih variacij. AFLP temelji na specifični PCR-ojačitvi fragmentirane genomske DNA in odkrivanju polimorfizma z avtoradiografi z gelsko elektroforezo. AFLP v veliki meri prispeva k ugotavljanju genetskih razlik v sevih ali tesno sorodnih vrstah različnih kraljestev, vključno z rastlinami, živalmi, bakterijami in glivami. AFLP lahko izvedemo z majhnimi količinami neznanih vzorcev DNA. Ne zahteva predhodnega poznavanja zaporedja in načrtovanja sond.

Koraki AFLP

1. Izolacija DNK
2. Prebava DNA z restrikcijskimi endonukleazami
3. Ligacija omejenih fragmentov DNA z adapterji
4. Selektivna ojačitev drobcev s posebnimi restrikcijskimi mesti
5. Ločevanje izdelkov PCR z gelsko elektroforezo
6. Vizualizacija gelske matrice z avtoradiografom

AFLP je bolj občutljiva in ponovljiva metoda, ki jo je mogoče uporabiti pri profiliranju DNA več taksonov, vključno z glivami, bakterijami, rastlinami in živalmi, brez predhodnega poznavanja zaporedij DNA. Pomaga pri prepoznavanju majhnih razlik med posamezniki v populacijah zaradi zelo občutljive narave. AFLP je pomemben tudi pri kartiranju genoma, forenzičnih študijah, testiranju staršev, genotipizaciji itd.

Slika 01: AFLP

Kaj je RFLP?

Polimorfizmi restrikcijskih fragmentov (RFLP) so tehnika, ki se uporablja za odkrivanje genetskih sprememb homolognih zaporedij DNA. To je prva metoda, razvita za profiliranje DNK. Organizmi imajo edinstvene prstne odtise ali profile DNK. RFLP služi kot pomembno orodje za analizo variacij med profili DNK intraspecifičnih ali tesno povezanih organizmov, saj imajo homologna zaporedja različna restrikcijska mesta (lokacije), ki so edinstvena za določen organizem. Ko se homologna DNA prebavi s posebnimi restrikcijskimi endonukleazami, bo to povzročilo različne profile DNK, ki so edinstveni za vsakega posameznika. Zatonačelo te metode je odkrivanje genskih variacij med organizmi z omejevanjem homologne DNA s specifičnimi restrikcijskimi encimi in analiza polimorfizma dolžine fragmentov z gelsko elektroforezo in blotiranjem. Vzorci črpanja so značilni za vsak organizem in so značilni za določene genotipe.

Koraki RFLP

1. Izolacija zadostne količine DNA iz vzorcev
2. Fragmentacija vzorcev DNA s specifičnimi restrikcijskimi endonukleazami v kratko zaporedje
3. Ločevanje dobljenih fragmentov z različno dolžino z elektroforezo v agaroznem gelu.
4. Prenos gelskega profila v membrano z Southern blot-om
5. Hibridizacija membrane z označenimi sondami in analiza polimorfizma dolžine fragmentov v vsakem profilu

RFLP je zelo pomembna tehnika pri odkrivanju dedovanja bolezni in iskanju tveganja za pojav bolezni med družinskimi člani. RFLP se pogosto uporablja tudi pri kartiranju genoma, prepoznavanju kriminalcev v forenziki, testiranju očetovstva itd. RFLP ima tudi več omejitev. RFLP zahteva predhodno znanje podatkov o zaporedju za načrtovanje sond za hibridizacijo. Prav tako zahteva izolacijo zadostne količine DNA iz vzorca za analizo, kar je v forenzičnih študijah težko.

Slika 01: Preslikava RRFLP

Kakšna je razlika med AFLP in RFLP?

Diff Article Sredina pred mizo

ALFP vs RFLP
AFLP vključuje selektivno PCR ojačanje prebavljene DNA.	RFLP ne vključuje PCR, razen če je PCR-RFLP.
Znanje zaporedja
Predhodno znanje zaporedja ni potrebno.	Za načrtovane sonde RFLP je potrebno predhodno znanje o zaporedju.
Zanesljivost
To je bolj zanesljivo.	To je manj zanesljivo v primerjavi z AFLP.
Učinkovitost pri odkrivanju polimorfizma
To ima večjo učinkovitost pri odkrivanju polimorfizma kot RFLP.	To je manj učinkovito v primerjavi z AFLP.
Stroški
To je malo dražje v primerjavi z RFLP.	To je v primerjavi z AFLP cenejše.
Aplikacije
AFLP so bili uporabljeni za kartiranje genoma, odvzem prstnih odtisov DNK, študije genske raznolikosti, testiranje očetovstva in forenziko	Analiza RFLP je pomembno orodje pri kartiranju genoma, lokalizaciji genov za genetske motnje, določanju tveganja za bolezni in testiranju očetovstva.

Povzetek - AFLP vs RFLP

AFLP in RFLP sta dve tehniki, ki se uporabljata kot genetska označevalca za oceno raznolikosti in oceno genskih razmerij v molekularni biologiji. AFLP je učinkovita in občutljiva metoda za odkrivanje genetskega polimorfizma med organizmi kot RFLP. Čeprav imata obe metodi različno učinkovitost pri odkrivanju genskih variacij, se še vedno uporabljata za odvzem prstnih odtisov DNK in diagnozo bolezni.